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分享!魚(yú)elisa檢測(cè)試劑盒在使用前要先準(zhǔn)備好的工作

發(fā)布時(shí)間:2022-09-21   點(diǎn)擊次數(shù):1010次
  魚(yú)elisa檢測(cè)試劑盒運(yùn)用雙抗夾心ELISA法定量測(cè)定血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體中(Ig)含量。下面我們來(lái)看看它具體實(shí)驗(yàn)前需要準(zhǔn)備好哪些工作以及操作步驟?
 
  實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作:
  1、準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品,如試管 吸頭 移液器 離心機(jī)等。
  2、確定試劑盒在有效期內(nèi)。
  3、仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。
  4、按說(shuō)明書(shū)確定所有試劑齊全(數(shù)量 體積)。
  5、標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。
  6、根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。
  7、按說(shuō)明書(shū)將所用試劑盒平衡至室溫,配制所需試劑。
 
  魚(yú)elisa檢測(cè)試劑盒的操作步驟:
  1、使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
  2、根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
  3、加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
  4、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
  5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
  6、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
  7、每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
  8、取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
  9、在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
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