人elisa檢測試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）水平。用純化的人遷移率族蛋白B1（HMGB-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加高遷移率族蛋白B1（HMGB-1），再與HRP標(biāo)記的高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）抗體結(jié)合形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的高遷移率族蛋白B（HMGB-1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算品中人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）濃度。
ELISA測定結(jié)果分為定量和定性兩大類。
1、定量測定則是對(duì)比昂本中待測抗原的多少進(jìn)行量值測定，一具體數(shù)值表示。它是用于非病原體抗原物質(zhì)的測定。如激素，細(xì)胞因子，腫瘤標(biāo)志物，小分子藥物等。定量測定的“量值”依據(jù)是試劑盒中所帶標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)測定得出的劑量反應(yīng)曲線(又稱標(biāo)準(zhǔn)曲線)。
2、定性測定只是對(duì)標(biāo)本中是否含有待測定抗原或抗體做出“有”或“無”的結(jié)論，分別用“陽性”和“陰性”來表示。通常是用于傳染性病原體的抗原或抗體的測定，以判斷特定病原體感染的存在與否。定性測定的“陽性”和“陰性”的判定依據(jù)必須是試劑盒所確定的陽性判定值。以前很多基層實(shí)驗(yàn)室均使用衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心供應(yīng)的弱陽性定值質(zhì)控血清的測定吸光度來判定結(jié)果，高于其判為陽性，反之為陰性，而不管試劑盒CUT-OFF值如何。
1、試劑盒使用前請(qǐng)保存在2-8℃。復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品若未用完，請(qǐng)廢棄。
2、微量試劑運(yùn)輸中顛簸和可能的倒置，會(huì)使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請(qǐng)1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。
3、從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?，F(xiàn)象，微加熱至40℃使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液。（加熱溫度不要超過50℃）使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫。
4、不同批號(hào)的試劑盒組份避免混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）。
5、充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)孵育前手工輕輕混勻。
6、在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測時(shí)建議作雙孔檢測。
7、試驗(yàn)中所用的試管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁在不同的液體之間混用！否則將影響試驗(yàn)結(jié)果。
8、試驗(yàn)中請(qǐng)穿著試驗(yàn)服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測血液或者其他體液標(biāo)本時(shí)，請(qǐng)按國家生物試驗(yàn)室安全防護(hù)條列執(zhí)行。
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