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昆蟲elisa檢測試劑盒對于樣本的要求是怎么樣的

發(fā)布時間:2018-11-24   點擊次數(shù):2290次
   昆蟲elisa檢測試劑盒對于樣本的要求是怎么樣的
  
  昆蟲elisa檢測試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定樣品中昆蟲保幼激素(JH)的水平。向預(yù)先包被了昆蟲保幼激素(JH)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入保幼激素(JH),溫育;溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗保幼激素(JH)抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺與樣品中昆蟲保幼激素(JH)的濃度呈正相關(guān)。
  
  昆蟲elisa檢測試劑盒樣本要求
  
  1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
  
  2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存或根據(jù)存放,時間做相應(yīng)溫度調(diào)整,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,(由于樣本種類過多,每個單位處理方式不一樣,本說明書不做詳細(xì)介紹)。
  
  昆蟲elisa檢測試劑盒注意事項
  
  1.從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
  
  2.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
  
  3.為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
  
  4.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
  
  5.底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
  
  6.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸,使用時必須注意安全。
  
  7.各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校準(zhǔn)其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
  
  8.每次試驗測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔濃度的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n)。
  
  9.配制試劑時,要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑,充分混勻?qū)y試結(jié)果尤為重要,使用微量振蕩器(使用頻率),如無微量振蕩器,可在反應(yīng)前手工輕輕晃動酶標(biāo)板1分鐘,例如做圓周動作,使加入孔中的反應(yīng)液混勻。
  
  10.實驗用酶標(biāo)儀應(yīng)嚴(yán)格按使用說明書規(guī)范操作,并在使用前充分預(yù)熱。
  
  11.手工洗板應(yīng)注意:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。自動洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
  
  
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